低速離心機(jī)是實(shí)驗(yàn)室中分離液體混合物(如細(xì)胞沉淀、組織勻漿)的常用設(shè)備,正確操作需結(jié)合轉(zhuǎn)速、時(shí)間與轉(zhuǎn)子類(lèi)型三要素,以確保分離效果并避免設(shè)備損壞。以下是具體指南:
一、轉(zhuǎn)速選擇:平衡分離需求與樣品安全
根據(jù)樣品類(lèi)型設(shè)定轉(zhuǎn)速
細(xì)胞沉淀:通常選擇800-1500×g(相對(duì)離心力),如分離哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如HeLa細(xì)胞)時(shí),1000×g離心5分鐘即可使細(xì)胞沉降至管底。
組織碎片:需更高轉(zhuǎn)速(2000-3000×g),例如分離肝臟勻漿中的細(xì)胞核時(shí),2500×g離心10分鐘可有效沉淀大顆粒碎片。
輕質(zhì)顆粒(如外泌體):需低速(500-800×g)結(jié)合長(zhǎng)時(shí)間離心,避免顆粒破裂。
避免超速運(yùn)行
低速離心機(jī)轉(zhuǎn)子設(shè)計(jì)有最大轉(zhuǎn)速限制(如4000rpm對(duì)應(yīng)約2000×g),超速可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)子變形或破裂。使用前需核對(duì)轉(zhuǎn)子銘牌標(biāo)注的最大轉(zhuǎn)速(RCF),而非僅參考電機(jī)轉(zhuǎn)速(rpm)。
二、時(shí)間設(shè)定:匹配轉(zhuǎn)速與分離目標(biāo)
短時(shí)間離心(1-5分鐘):適用于快速沉淀大顆粒(如血細(xì)胞、酵母細(xì)胞),但可能殘留細(xì)小碎片。
長(zhǎng)時(shí)間離心(10-30分鐘):用于分離微小顆粒(如病毒顆粒、細(xì)胞器)或需高純度沉淀的場(chǎng)景。
梯度離心優(yōu)化:若需分離不同密度組分(如密度梯度離心法分離細(xì)胞器),需分階段設(shè)定轉(zhuǎn)速與時(shí)間(如先低速離心去除大碎片,再高速離心分離目標(biāo)組分)。
三、轉(zhuǎn)子選擇:適配樣品量與容器類(lèi)型
固定角轉(zhuǎn)子:適用于高容量樣品(如50mL離心管),但沉淀顆粒集中于管底側(cè)壁,需調(diào)整取樣位置。
水平轉(zhuǎn)子(擺桶轉(zhuǎn)子):沉淀顆粒均勻分布于管底,適合需要平鋪沉淀的場(chǎng)景(如DNA提取后的乙醇沉淀)。
微量離心轉(zhuǎn)子:適配0.2mL或1.5mL離心管,用于小體積樣品(如PCR反應(yīng)液)的快速分離。
四、操作注意事項(xiàng)
對(duì)稱平衡:離心管需按轉(zhuǎn)子要求對(duì)稱放置,質(zhì)量誤差不超過(guò)0.1g,避免振動(dòng)損壞設(shè)備。
蓋緊管蓋:防止離心過(guò)程中液體泄漏腐蝕轉(zhuǎn)子或電機(jī)。
預(yù)冷處理:若需低溫離心(如4℃分離蛋白質(zhì)),提前將轉(zhuǎn)子與離心管置于冰箱預(yù)冷。
降速停止:離心結(jié)束后等待轉(zhuǎn)子自然停止,勿強(qiáng)行制動(dòng),防止樣品重新懸浮。
總結(jié):低速離心機(jī)的科學(xué)使用需結(jié)合樣品特性(顆粒大小、密度)、分離目標(biāo)(純度、回收率)及轉(zhuǎn)子類(lèi)型綜合決策。建議通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化轉(zhuǎn)速-時(shí)間組合,并嚴(yán)格遵循設(shè)備說(shuō)明書(shū)中的轉(zhuǎn)速與轉(zhuǎn)子匹配要求,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性與設(shè)備安全性。